सेंगर अनुक्रमण को डीएनए अनुक्रमण की एक विधि के रूप में परिभाषित किया गया है जो इन विट्रो डीएनए प्रतिकृति के दौरान डीएनए पोलीमरेज़ द्वारा चेन-टर्मिनेटिंग डाइडोक्सीन्यूक्लियोटाइड्स को शामिल करने पर आधारित है। केशिका वैद्युतकणसंचलन द्वारा सेंगर अनुक्रमण स्वर्ण-मानक डीएनए अनुक्रमण तकनीक है जिसका उपयोग जीवन विज्ञान प्रयोगशालाओं में कई प्रयोगात्मक वर्कफ़्लो में किया जाता है। सेंगर अनुक्रमण में, डीएनए पोलीमरेज़ बढ़ती श्रृंखला में न्यूक्लियोटाइड जोड़कर एकल-फंसे डीएनए टेम्पलेट्स की प्रतिलिपि बनाते हैं। चेन बढ़ाव प्राइमर के 3' सिरे पर होता है, एक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड जो टेम्पलेट से जुड़ा होता है। विस्तार उत्पाद में जोड़े गए डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड्स को टेम्पलेट से मेल खाते हुए बेस-जोड़ी द्वारा चुना जाता है।
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